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            專(zhuān)家對ELISA試劑盒的評價(jià)

            更新時(shí)間:2017-03-10      瀏覽次數:1703

            ELISA試劑盒是一種十分常用的定性定量方法,人體和動(dòng)物、體外細胞培養中超過(guò)80%蛋白定量都使用其作為檢測的手段。ELISA試劑盒價(jià)格一般非常昂貴,但各家試劑公司的質(zhì)量卻良莠不齊。ELISA的試劑盒有用于科研的,也有用于臨床診斷的。應用于臨床診斷的試劑盒必須有衛生部的許可文號,國家對應用于臨床診斷的試劑盒有嚴格的規定和要求,制定相關(guān)的手則來(lái)管理試劑盒的質(zhì)量。 

            仔細閱讀說(shuō)明書(shū),對說(shuō)明書(shū)的內容有一個(gè)詳細的了解。 審查內容包括: 

            1. 試劑盒的名稱(chēng):ELISA試劑盒名稱(chēng)一般由“(物種)+(測定指標)+酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA)”,物種和測定指標不能搞錯,否則買(mǎi)錯了就是你的事情;另外有的試劑盒說(shuō)明書(shū)試劑盒名稱(chēng)明顯與寫(xiě)在試劑盒上的名稱(chēng)不符,這要引起你的警惕。 

            2. 用途:應用于科研還是臨床診斷,用于臨床診斷的有衛生部的批準文號。 

            3. 測定原理:現在ELISA試劑盒除非是測定抗體的以外,一般使用的是雙抗體夾心法,此種方法大多數用的是增強的雙抗體夾心法,即使用生物素-親和素系統,還有少數的指標可能使用競爭法,這類(lèi)方法適用于半抗原的測定。具有復雜結構的多表位蛋白抗原,其雙抗體夾心法中的一個(gè)抗體必須用單抗,否則背景很高。當然如果兩個(gè)都是單抗(這兩個(gè)單抗針對不同表位),那么測定的線(xiàn)性范圍就較寬,試劑盒性能就較好;一個(gè)用單抗,一個(gè)用多抗,測定的靈敏度會(huì )較高。某些簡(jiǎn)單的化合物用ELISA測定時(shí),因為沒(méi)有兩個(gè)或以上的表位,一般只能作為半抗原,只能用競爭法測定。如果你發(fā)現有測定簡(jiǎn)單化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用雙抗體夾心法作測定原理時(shí),這個(gè)試劑盒你就要懷疑了。另外還要說(shuō)明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區別。 

            一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線(xiàn)呈鐘形,隨著(zhù)待則標本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后,測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開(kāi)始下降直至不顯色,即所謂的“鉤狀效應”(hook eHect),也就是我們在免疫沉淀試驗中所稱(chēng)的“帶現象”(zone phenomenon)。所以當使用一步雙抗體夾心法時(shí),樣品濃度太高,有時(shí)會(huì )出現測不出來(lái)的現象,此時(shí)要作適當的稀釋才能準確測定。 

            4. 試劑盒的組成:用雙抗體夾心法作為測定的方法時(shí),試劑盒的組成一般包括: 已包被單抗的酶標板:一塊,有96孔的,也有48孔的,可拆缷,外面有鋁箔袋密封,打開(kāi)后有干燥劑,實(shí)驗時(shí)暫未使用的酶標條要連帶干燥劑密封好,放在4℃冰箱中妥善保存。 而應用于科研的試劑盒,國家則沒(méi)有出臺相關(guān)的質(zhì)量管理規定,因此試劑盒質(zhì)量也就無(wú)法保障。在這種情況下,許多劣質(zhì)的試劑盒在市面泛濫,不少同行戰友為此浪費了大量的時(shí)間和金錢(qián),卻沒(méi)有得到一個(gè)良好的實(shí)驗結果。下面給戰友們介紹一下如何判斷試劑盒的質(zhì)量,選購好的試劑盒。 

            ELISA質(zhì)量保證是一個(gè)復雜的過(guò)程,許多重要的環(huán)節都影響到檢測的質(zhì)量: 

            一、操作因素對ELISA結果的影響 

            ELISA操作步驟復雜,操作不當將引起較大的誤差。以下敘述各個(gè)步驟中的影響因素。 

            1.加樣 2.溫育 3.洗滌 4.顯色 5.比色 

            2.二、灰區的設置 

            通常情況下,ELISA定性實(shí)驗以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)報告結果,兩者間有一條分界線(xiàn)被稱(chēng)為“陽(yáng)性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測定結果報告的依據。 

            三、標本復查 

            ELISA手工檢測過(guò)程復雜,影響因素較多,即使室內質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結果的差異,因此加大復查力度是保證結果準確性的可靠方法,比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽(yáng)性標本及少見(jiàn)模式的檢測結果進(jìn)行復查。 

            四、結果判斷和報告 

            常用下列幾種方法表示結果: 

            1.定性測定 

            2.半定量測定 結果一般以滴度表示。 

            3.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定,繪制標準曲線(xiàn),結果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線(xiàn)。 

            4.結果報告

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